目前,市面上关于实验中消除生物样品自体荧光的使用方法有很多,比如化学交联固定诱导的自发荧光、图像处理技术、光谱扫描和荧光团选择 、使用新型荧光探针等,那关于自体荧光您了解哪些?
什么是自体荧光?
生物体内的一些内源性物质(天然存在的分子)在没有添加外来荧光染料的情况下,受到特定波长的光激发后,自身能发出荧光的现象。
自体荧光的信号通常来源:
01. 脂褐素:是细胞内的一种脂质和蛋白质的氧化聚合产物,常见于衰老细胞。其荧光强度可以作为细胞衰老程度的一个标志。
02. 弹性纤维:主要存在于有弹性的组织中,像皮肤、血管、肺部等组织中,增强组织的弹性和韧性。
03. 维生素A:本身一般没有自体荧光,但在固定或免疫荧光染色时,会与其它物质相互作用,产生干扰荧光成像的信号。
04. NADH:细胞呼吸过程中的关键辅酶,参与细胞的能量代谢。如神经元、心肌细胞、肝细胞等需要高能量的细胞。
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自体荧光有哪些影响?
在实际应用中,自体荧光现象会干扰目标荧光信号的观察,对实验带来一些影响:
01. 影响成像:自体荧光会增加背景噪声,这可能会掩盖微弱的信号,降低实验的信噪比。
02. 非特异性染色:在组织免疫荧光等实验中,自体荧光可能导致非特异性染色,影响对实验结果的准确解释。
03. 通道干扰:在多色流式细胞术等实验中,自体荧光可能会在不同通道间产生干扰,使得数据分析复杂化。
04. 样品制备问题:塑料容器、培养基添加剂、纸质标签等实验室常用物品也可能产生自体荧光,这些都需要在实验设计时予以考虑。
05. 固定和染色过程:使用醛类固定剂或某些染料可能增加样品的自体荧光。
常见的荧光淬灭方法
1.荧光淬灭试剂
◎ 常用的减少自体荧光的方法
◎ 缺点:
1. 会减弱实验中原本想要检测的荧光染料的信号。这意味着,虽然自体荧光被减少,但目标信号也可能受损。
2. 会引入非特异性背景荧光,即在其它荧光波长处增加噪声,而干扰目标信号的检测和分析。
3. 只适合单一免疫荧光染色
4. 只适合已经固定在载玻片上的组织切片
2.强光照射(LED/UV)
◎不使用化学试剂的自体荧光淬灭方法
◎缺点:
1.淬灭效率低。需要长时间照射(几个小时到几天)才能完成所有载玻片上组织的自体荧光淬灭。
2.组织会因长时间光照射导致高水平的热损伤,影响样品的生物结构和功能,从而影响实验结果的准确性。
TiYO™ 自体荧光淬灭系统
艾贝泰代理的TiYO™ 自体荧光淬灭系统采用光漂白LED技术,强力淬灭自体荧光,大幅提高信噪比,呈现清晰无比的荧光图像,无需复杂程序和试剂,一步淬灭组织切片的自体荧光。特别适用于处理高度自发荧光的样本。
产品规格
配件 |
样品托盘,电源线 |
控制 | 仅开/关按钮 |
每次运行的样本数 | 最多12个(显微镜下切片;置于TiYO腔室的自由浮动组织) |
使用环境 | 0~40°,20~85%RH |
功率 | 360W |
电源 | AC100~240V,50/60Hz |
尺寸/重量 |
291(长)×210(宽)×285(高)mm,10Kg |
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