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CCK-8,细胞增殖检测的不二选择

作者:上海中乔新舟生物科技有限公司 2021-06-24T10:49 (访问量:6321)

什么是细胞增殖检测
细胞增殖是细胞在周期调控的因子下,通过DNA复制等反应,完成细胞分裂的过程。在细胞增殖中,新细胞的产生过程影响着体内所有组织的发育、生长和维持,同时,它也被严格调控着,以防失控的细胞分裂(可出现在各种癌症)导致肿瘤的形成和器官功能的破坏。正因为细胞增殖对生物活动的这种广泛影响,其在各种环境中的准确评估变得十分重要。

                                                           肿瘤细胞增殖和转化过程
细胞增殖是通过细胞分裂引起的细胞数量增加,在整个生命周期中对正常组织发育和维持是必须的。一些类型的细胞会处于持续增殖状态,如皮肤和骨髓细胞,但许多成人组织中的细胞会处于非增殖状态,只有在损伤或感染时,才能被激活来补充细胞。与之相反,细胞周期关键基因突变引起的细胞增殖失调是各类癌症的标志,会造成肿瘤异常的不受控制的生长。
增殖检测一般用于分析分裂中的细胞数量的变化,进而反应细胞的生长状态及活性,细胞增殖检测是细胞分析和药物研发中经常会使用的手段。目前广泛应用于肿瘤生物学,分子生物学,药代动力学等领域。


细胞增殖检测的方法
一类是直接法,这种方法就是直接测定进行分裂的细胞数来评价细胞的增殖能力,另一类是间接的方法,我们通过检测细胞的活力来评价细胞的增殖能力。
常见的细胞增殖检测方法包含:直接计数法;MTT检测法;MTS检测法;CCK-8检测法;3H-TdR渗入法;Brdu/EdU检测法;CFSE检测法;刃天青还原法;活细胞蛋白酶底物法/ATP法等。

                                                                     常见检测方法对比
其中,MTT比色是一种目前被广泛采用的检测细胞生长和存活的方法。


CCK-8试剂盒
CCK-8试剂盒全称Cell Counting Kit-8,是一种基于WST-8(化学名:2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐)的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒

                                                               CCK-8检测细胞活性原理图
其工作原理为:在电子耦合试剂存在的情况下,可以被线粒体内的脱氢酶还原生成高度水溶性的橙黄色的甲臜产物(formazan)。颜色的深浅与细胞的增殖成正比,与细胞毒性成反比。使用酶标仪在450mM波长处测定OD值,间接反映活细胞数量。
CCK-8被经常用于药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏试验等。
优点:
· 酚红和血清对CCK8法的检测不会造成干扰;
· 灵敏度高,可以测定较低细胞密度;
· 细胞毒性非常低,因此加入WST-8显色后,可以在不同时间反复用酶标仪读数从而找到最佳测定时间;
· 检测时间短
· 重复性优于MTT法;
· 操作简单,省时省力,省去了洗涤细胞,适合批量样品检测
· 检测试剂很稳定。




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