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常用的细胞凋亡检测方法汇总(一)
让我们一起学习一下吧~
细胞凋亡是一个进程，该期间凋亡相关通路被激活，各种分子参与调控，出现一系列的凋亡特征。例如细胞凋亡早期改变发生在细胞膜表面，磷脂酰丝氨酸（PS）从细胞膜内转移到细胞膜外；又例如当细胞发生凋亡时，染色质相较正常细胞而言会固缩。因此，通过检测相应的指标可鉴定凋亡水平。
本文分享了常见的几种细胞凋亡检测方法，让我们一起学习一下吧~
形态学检测
发生凋亡的细胞在形态上有一定的特征：相较正常细胞而言，凋亡细胞体积变小，凋亡Ⅰ期的细胞核内染色质高度盘绕，出现许多称为气穴现象（cavitations）的空泡结构；Ⅱa期细胞核的染色质高度凝聚、边缘化；凋亡晚期，细胞核裂解为碎块，产生凋亡小体。在透射电子显微镜下可看到凋亡细胞体积变小，表面微绒毛消失，细胞质浓缩。使用核染料（Hoechst系列、DAPI）染色后，在激光共聚焦扫描显微镜下可看到凋亡细胞的细胞核呈致密浓染或细胞核裂解成碎块状呈致密浓染。
膜通透性改变
细胞发生凋亡时，细胞膜通透性会逐渐降低。Hoechst系列可以穿透细胞膜，染色后凋亡细胞荧光会比正常细胞明显增强。膜不可渗透性染料（例如：Propidium Iodide/PI）不能穿透细胞膜，对于具有完整细胞膜的正常细胞不能染色。而对于坏死细胞，其细胞膜的完整性丧失，膜不可渗透性染料染料可以染色坏死细胞。根据此特性，使用Hoechst系列和PI染料双染后，使用流式细胞仪或荧光显微镜检测时，正常细胞为弱红色荧光＋弱蓝色荧光，凋亡细胞为弱红色荧光＋强蓝色荧光，坏死细胞为强红色荧光＋强蓝色荧光。
磷脂酰丝氨酸（PS）
翻转到细胞膜外
细胞凋亡早期改变发生在细胞膜表面，这些细胞膜表面的改变之一是磷脂酰丝氨酸（PS）从细胞膜内转移到细胞膜外，使PS暴露在细胞膜外表面。PS是一种带负电荷的磷脂，正常主要存在于细胞膜的内面，在细胞发生凋亡时细胞膜上的这种磷脂分布的不对称性被破坏而使PS暴露在细胞膜外。PS转移到细胞膜外不是凋亡所独特的，也可发生在细胞坏死中。两种细胞死亡方式间的差别是在凋亡的初始阶段细胞膜是完好的，而细胞坏死在其早期阶段细胞膜的完整性就破坏了。
Annexin V具有易于结合到磷脂类如PS的特性，对PS有高度的亲和性。因此，该蛋白可充当一敏感的探针检测暴露在细胞膜表面的PS。7-AAD是一种非渗透性的核酸荧光染料，该染料不能透过活细胞的细胞膜，但可穿透膜损伤细胞如晚期凋亡细胞或者坏死细胞的细胞膜并与其内的DNA结合，可用来区分存活的早期细胞和坏死或晚期凋亡细胞。因此，可以采用AnnexinV与7-AAD双染的方法，通过流式检测细胞早期凋亡。
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