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福尔马林固定、石蜡包埋（FFPE）组织切片的存档代表了珍贵且来源广泛的生物医学研究材料。随着越来越多的研究人员转向 FFPE 样品的分子分析，开发特定的操作步骤，考虑这些样品的独特性质就变得越来越重要。QIAGEN 在 FFPE 样本纯化及下游检测整个流程中都提供完善的解决方案。 | |||||||||||||
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QIAamp DNA FFPE Tissue Kit —— 从石蜡包埋组织中纯化基因组 DNA
使用QIAamp DNA FFPE Tissue Kit，从不同的FFPE组织样本中纯化基因组DNA。采用real-time定量PCR扩增prnp基因（78 bp、464 bp和727 bp）产物 |
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RNeasy FFPE Kit —— 从石蜡包埋组织中纯化总 RNA
从样本中去除石蜡后，在优化的裂解缓冲液中，采用蛋白酶K酶切，只需15分钟即可完成样本裂解，且不影响RNA的产量。裂解后，将样本置于80ºC孵化15分钟，逆转福尔马林交联。然后使用DNase和DNase Booster Buffer高效去除基因组DNA，包括FFPE样本中的小DN**段。最后，使用RNeasy MinElute离心柱纯化浓缩的RNA。RNA的洗脱体积仅为14–30 µl，因此可以减少下游操作中的反应体积。 |
 图2 RNeasy FFPE实验流程。 | ||||||||||||
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使用RNeasy FFPE Kit从大鼠肾脏中纯化总RNA。在Rotor-Gene Q实时荧光定量PCR分析仪上，使用（+RT）或不使用（-RT）逆转录酶进行PGK1（磷酸甘油酸激酶1）的real-time RT-PCR分析。-RT曲线证明，使用RNeasy FFPE Kit纯化的RNA中几乎不含基因组DNA。 miRNeasy FFPE Kit —— 从石蜡包埋组织纯化包含 miRNA 的总 RNA
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图3 来自FFPE样本的成功的real-time RT-PCR分析。 | ||||||||||||
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采用福尔马林固定大鼠肝脏组织24小时或60小时，然后使用miRNeasy FFPE Kit纯化包括miRNA在内的总RNA。使用miScript PCR System和纯化的RNA作为模板进行定量real-time RT-PCR分析，检测miRNA miR-16和miR-29a以及PGK1基因的较大mRNA。结果显示，从同一洗脱液中可同时检测到上述两种miRNA和mRNA。 产品列表：
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 图4 高效的real-time RT-PCR。 | ||||||||||||
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以上信息来源于QIAGEN官网！ | |||||||||||||
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