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前 言
基质胶是3D细胞培养、类器官、成瘤、侵袭、血管生成等实验的“万能支架”。然而,从解冻到铺板,从浓度选择到结果判读,稍不留神就可能“翻车”。翌圣生物结合上万次实验反馈,整理出这份“避坑指南”,助你一次上手,稳拿高分数据。
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到货 & 储存
| 问题 | 翌圣建议 | 
| 收到货后如何保存? | 将本产品置于-20℃环境存放;若短暂放置,4 ℃不超过7天。 | 
| 能否反复冻融? | 不建议反复冻融;首次融化后立即分装(200 µL/管),-20 ℃保存。 | 
| 如何进行融化? | 冷冻状态的基质胶可以在操作前一天埋藏于碎冰中,再转移入4 ℃冰箱,次日即可使用。适当延长4℃融化时间可以有效减少基质胶中的气泡。 | 
03
颜色/浓度怎么选?
| 类型 | 特点 | 适用场景 | 
| 含酚红 | pH指示 | 常规实验都可以使用含酚红产品,由于酚红存在时,在温度、pH不同的情况下液体会出现颜色的差异,颜色可以在明黄色至暗红色之间变化。 | 
| 无酚红 | 无颜色干扰 | 涉及颜色检测的实验,推荐使用不含酚红的基质胶,如对子宫内膜细胞培养必须使用不含酚红的基质胶。此外,酚红是一种潜在的内分泌干扰物,有可能会干扰实验动物体内激素的自然产生和代谢能力。 | 
| 标准浓度 | 蛋白浓度:8 - 12 mg/mL | Transwell实验、皮下成瘤实验 | 
| 高浓度 | 蛋白浓度:18 - 22 mg/mL,凝胶3-5 min | 皮下成瘤中较难成瘤的细胞系 | 
| 低生长因子 | 标准浓度基质胶的基础上做了减生长因子处理 | 类器官培养、血管生成 | 
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实验细节
| 场景 | 高频问题 | 解决锦囊 | 
| 皮下成瘤 | 荷瘤不成功可能的原因 | 取处于对数生长期的细胞,细胞达 80 - 90% 左右密度为宜 | 
| 选择 4 - 6 周龄裸鼠,小于 4 周可能不耐受过早死亡,大于 6 周免疫力会增强,不易成瘤。 | ||
| 可能是小鼠免疫排斥,建议更换免疫缺陷程度更大的小鼠 | ||
| 可以在接种后一周补种1次,可以很好的提高成功率 | ||
| 肿瘤长起来后又消失的原因 | 很可能是由于炎症反应,肿瘤细胞被小鼠自身吸收造成的。若后续肿瘤依旧未长出来,可考虑更换免疫缺陷程度更大的小鼠。 | |
| 血管生成 | 成管实验中细胞 不能形成连续的网格 | 建议使用3-5代状态较好且融合度70%-80%的HUVEC细胞 | 
| 细胞数量过少会使细胞无法形成连续的网络 | ||
| 4 - 18 h可见血管生成。建议每4个小时观察一次。 | ||
| 侵袭实验 | 细胞不转移 | 细胞侵袭转移能力比较弱 | 
| 细胞的活性太差,活性不好的细胞做侵袭实验难度较大 | ||
| 用胰酶消化后,必须将含血清的培养基洗去 | ||
| 类器官实验 | 类器官传代的标准 | 不同类器官时间不同,通常7-14日、直径100-200um左右可以传代,有些发育慢的可能要数周才能发育到适合传代状态。 | 
| 鉴定类器官的方法 | 最基础的通过显微镜和H&E染色观察类器官形态;进一步可以用免疫荧光检测该类器官是否表达相应的biomarker; | |
| 为什么观察到的形态却和文献不一致? | 决定类器官形态的因素有很多,样本来源是否相同、选用的细胞因子品质是否有差异都有可能改变最终的类器官形态。 | 
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产品详情
| 产品名称 | 货号 | 规格 | 
| Ceturegel® Matrix LDEV-Free基质胶 | 40183ES | 1.5 mL/5 mL/10 mL | 
| Ceturegel® Matrix Phenol Red-Free,LDEV-Free 基质胶 | 40184ES | 1.5 mL/5 mL/10 mL | 
| Ceturegel® Matrix GFR,LDEV-Free 基质胶 | 40185ES | 1.5 mL/5 mL/10 mL | 
| Ceturegel® Matrix GFR,Phenol Red-Free,LDEV-Free 基质胶 | 40186ES | 1.5 mL/5 mL/10 mL | 
| Ceturegel® Matrix High Concentration,LDEV-Free 基质胶 | 40187ES | 1.5 mL/5 mL/10 mL | 
| Ceturegel® Matrix High Concentration,Phenol Red-Free,LDEV-Free 基质胶 | 40188ES | 1.5 mL/5 mL/10 mL | 
| Ceturegel® Matrix High Concentration,GFR,LDEV-Free 基质胶 | 40189ES | 1.5 mL/5 mL/10 mL | 
| Ceturegel® Matrix hESC-Qualified,LDEV-Free 基质胶 | 40190ES | 1.5 mL/5 mL/10 mL | 
| Ceturegel® Matrix for Organoid culture,Phenol Red-Free,LDEV-Free 基质胶 | 40191ES | 1.5 mL/5 mL/10 mL | 
| Ceturegel® Matrix for Organoid culture,Phenol Red-Free,LDEV-Free Plus基质胶 | 40192ES | 1.5 mL/5 mL/10 mL | 
