mTTx RNA Probe RT-qPCR MasterMix说明书-分析方法-资讯-生物在线

mTTx RNA Probe RT-qPCR MasterMix说明书

作者：上海信裕生物科技有限公司 2021-05-18T00:00 (访问量:1081)

mTTx RNA Probe RT-qPCR MasterMix

产品编号	产品名称	规格	价格(元)	说明书
XY9206A	热启动mTTx DNA/RNA 聚合酶 (5U/ul)	250U	1,750
XY9261A	mTTx RNA Probe RT-qPCR MasterMix	1 ml	750
XY9261B	mTTx RNA Probe RT-qPCR MasterMix	25 ml	10,000
XY92262	RNA TaqMan荧光PCR核酸检测试剂盒开发服务	套	询价

TTx DNA聚合酶源于Tth DNA聚合酶，而逆转录活性较Tth DNA聚合酶大幅提高，在优化的反应Buffer中，TTx表现出卓越的RT-PCR特性，但TTx DNA Polymerase的活性仍然依赖于对PCR有抑制活性的Mn²⁺，这种专用的反应Buffer系统限制了TTx应用的拓展性。mTTx DNA/RNA聚合酶经电子重构架技术，改变了TTx的活性配体中心，使其在Mg²⁺条件下仍然具有极强的逆转录活性。mTTx DNA/RNA Polymerase在Mg²⁺条件下对于DNA模板和RNA模板扩增能力几乎无偏差，这种独有的特性使得mTTx不再受限于反应Buffer系统，增加了其应用的拓展性，使得多种类型的实验得以实现，包括：采用单酶进行TaqMan RT-PCR、在单管相同的Buffer系统中对RNA和DNA进行多重检测、超多重的RNA模板扩增、RNA的NGS建库、高保真RT-PCR扩增等。

主要特征

依赖于DNA模板的聚合酶活性；
5'-3'外切酶活性，用于TaqMan探针切割；
金属配体离子为Mg²⁺，通常使用浓度2-3.5mM；
可以有效的使用dUTP，建立防污染体系；
相比于TTx DNA聚合酶，mTTx的耐热性能有所下降，92℃条件下的半衰期为30min；
热启动版本的mTTx在50℃条件下100%无活性，92℃加热5min后恢复活性。

单位定义

一个活力单位即在在68°C条件下，30分钟内催化10 nmol dNTP的掺入反应成为酸不溶性物质所需的酶量。

储存

-20℃可保存3年，避免反复冻融。

使用方法（以mTTx RNA Probe RT-qPCR MasterMix为例）

1. 按以下组分配制RT-qPCR反应液
2×mTTx MasterMix 10 μl
上游引物（10 μM）                                             0.4 μl
下游引物（10 μM）                                             0.4 μl
荧光探针（10 μM）                                             0.2 μl
RNA X μl
ddH₂O Up to 20 μl
注意：引物和探针的使用浓度可在0.1-0.8ul直接调整。
2. Direct One-Step RT-PCR程序
92℃ 5 min (热启动)
60℃ 5 min (逆转录)
92℃ 10 s
60℃ 30 s（收集信号）循环35-45次
注意：mTTx的最佳变性温度为92℃，其它温度条件都会导致试剂性能下降。逆转录步骤的温度可根据实际情况在58-70℃调整。

实例展示

1. 以2019新冠病毒N基因体外转录RNA直接作为模板，应用mTTx RNA Probe RT-qPCR MasterMix对不同拷贝的目标RNA进行TaqMan qPCR扩增，结果表明不同拷贝数的RNA，扩增性能良好。

2. 应用mTTx RNA Probe RT-qPCR MasterMix对不同拷贝的目标DNA和RNA进行TaqMan qPCR扩增，结果表明该产品对DNA模板和RNA模板扩增几乎无偏差，RNA模板比DNA模板更容易检出。

3.将不同数量的Jurkat细胞直接加入到TaqMan PCR反应体系中，应用mTTx RNA Probe RT-qPCR MasterMix进行内参基因GAPDH的TaqMan qPCR扩增。

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