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PP1

MCE 国际站：PP1

品牌：MedChemExpress (MCE)

货号：HY-13804

CAS：172889-26-8

Synonyms：AGL 1872; EI 275

纯度：0.99

存储条件：粉末 -20°C 3 年 4°C 2 年 溶剂中 -80°C 2 年 -20°C 1 年

运输条件：美国大陆的室温；其他地方可能有所不同。

产品活性：PP1 是一种有效的选择性 Src 家族抑制剂，抑制 Lck 和 Fyn，IC50 分别为 5 和 6 nM。

细胞实验：纯化的人外周血 T 细胞中抗 CD3 刺激的酪氨酸磷酸化的抑制测量如下。所有孵育均在 37°C 的 Eppendorf Thermomixer 5436 中进行，混合设置为 11。细胞（100 μL RPMI 1640 培养基中的 1×106）与药物孵育 15 分钟，然后与 1 μg 抗 CD3/mL（抗 leu4，100 μg/mL）孵育 6 分钟。反应的最终体积为 115 μL。通过添加 57.5 μL 3× 溶解缓冲液（在添加前在 100°C 下孵育）来终止反应。将样品混合，煮沸 5 分钟，并储存在 -70°C 下。在 10% SDS-聚丙烯酰胺凝胶上对这些细胞裂解物进行蛋白质印迹分析，用多克隆抗磷酸酪氨酸抗体进行检测，用 I 标记的蛋白 A (ICN) 检测免疫复合物。为了进行定量分析，使用 Molecular Dynamics 激光扫描仪扫描胶片，并在抗 CD3 存在下（有和无药物）定量主要底物带 p70 的光密度。抑制百分比计算如下：(1-(有药物时的 p70 光密度单位/无药物时的 p70 单位))×100。IC50 等于测量到 50% 抑制时的化合物浓度[1]。MCE 尚未独立证实这些方法的准确性。它们仅供参考。

激酶实验：将 Protein A-Sepharose 珠子（制备成 50% (w/v) 悬浮液）以 250 μL/mL 的浓度加入抗体/裂解物混合物中，并在 4°C 下孵育 30 分钟。然后将珠子在 1 mL 裂解缓冲液中清洗两次，在 1 mL 激酶缓冲液中清洗两次（25 mM HEPES、3 mM MnCl2、5 mM MgCl2 和 100 μM 正钒酸钠），并在激酶缓冲液中重新悬浮至 50% (w/v)。将 25 微升珠子悬浮液与适当浓度的化合物和 [γ-32P]ATP（25 μL/孔，200 μCi/mL 激酶缓冲液溶液）一起加入到涂有烯醇化酶的 96 孔高蛋白结合板的每个孔中。在 20°C 下孵育 20 分钟后，将 60 μL 含有 10 mM ATP 的沸腾 2× 溶解缓冲液添加到测定孔中以终止反应。从孔中取出 30 微升样品，煮沸 5 分钟，然后在 7.5% SDS-聚丙烯酰胺凝胶上运行。随后将凝胶干燥并暴露于柯达 X-AR 胶片。为了定量，使用 Molecular Dynamics 激光扫描仪扫描胶片，并确定主要底物带烯醇化酶 p46 的光密度。从化合物的密度与浓度图中确定导致 50% 烯醇化酶磷酸化抑制 (IC50) 的化合物浓度。在测量化合物对抗 Lck 活性的配套实验中，使用 50 mM EDTA、1 mM ATP 在 Skatron 收集器上对测定板进行两次清洗循环。然后将闪烁液（100 μL）加入孔中，使用 Pharmacia Biotech 微型 β 计数器测量 P 掺入量。通过绘制酶活性抑制百分比与化合物浓度的关系图，可确定导致 50% 酶活性抑制的化合物浓度 (IC50)[1]。MCE 尚未独立证实这些方法的准确性。它们仅供参考。

IC50 & Target：5 nM (Lck), 6 nM (Fyn), 250 nM (EGFR), >50 μM (JAK2)[1]

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参考文献：

[1]. Hanke JH, et al. Discovery of a novel, potent, and Src family-selective tyrosine kinase inhibitor. Study of Lck- and FynT-dependent T cell activation. J Biol Chem. 1996 Jan 12;271(2):695-701.