小鼠IgG-DAB显色试剂盒-蛋白检测-试剂-生物在线
北京索莱宝科技有限公司--实验室产品
小鼠IgG-DAB显色试剂盒

小鼠IgG-DAB显色试剂盒

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产品名称: 小鼠IgG-DAB显色试剂盒

英文名称: Western Blotting Mouse IgG DAB Chromogenic Reagent Kit

产品编号: SW1010

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产品产地: 北京/solarbio

品牌商标: Solarbio

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使用范围: null

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 Western blotting DAB检测试剂盒
货号:SW1010 Western blotting (小鼠IgG)DAB显色试剂盒 
产品内容: 1. 封闭试剂 30g。 2. 10倍浓缩抗体稀释液 50ml。 3. HRP标记二抗, 0.5ml,效价1:500-3000。 4. 20倍DAB浓缩显色液,5mlA+5mlB。
保存:
-20℃避光密闭保存,一年有效。若经常使用,可将封闭试剂,抗体稀释液和20倍DAB显色液B存放于2-8℃以方便使用。
产品简介:
SDS-PAGE电泳后,蛋白质按照分子量大小分离,转移到固相载体(例如**纤维素薄膜)后,固相载体以非共价键形式吸附蛋白质,以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原,与对应的抗体起免疫反应,再与酶标记的第二抗体起反应,经过底物显色以检测电泳分离的特异性的蛋白。
操作步骤:(仅供参考) 常规电泳转膜后: 1) 清洗转印膜:将膜剥离下后,作好标记,一般在左上角剪一缺口。室温用TBS-T漂洗3次每次5min,以尽量洗去转印膜上的SDS,防止影响后面的抗体结合。2) 按5g封闭试剂加100ml双蒸水计,配制膜封闭液,配好的膜封闭液为乳白色悬液,将漂洗过的转印膜,封闭液内,摇床震动,室温封闭30min。用TBS-T ,PH7.6洗液,室温漂洗3次每次5min。3) 将10×抗体稀释液用双蒸水稀释成1×(10ml 10×抗体稀释液加入90ml双蒸水,混匀,可4℃保存三个月)。此稀释液可作为一抗和二抗的稀释液。4) 用1×的抗体稀释液稀释抗体。根据用量以及一抗的推荐稀释浓度来稀释一抗。将杂交膜放入杂交袋中,加入一抗工作液,封口,4℃孵育过夜或37℃摇动孵育2h。此用过的抗体一般可回收第二天再使用一次。注:如果所加一抗不同,可在此步将膜沿电泳方向剪成条,分别作好标记,分开孵育。5) 用TBS-T ,PH7.6洗液,室温漂洗3次每次5min。6) 用稀释好的抗体稀释液稀释抗体。根据用量,按10ml抗体稀释液加入10ul HRP标记二抗的比例,配制二抗工作液。将杂交膜放入杂交袋中,加入二抗工作液,封口, 37℃摇动孵育1h。此用过的抗体一般可回收第二天再使用一次。7) 用TBS-T ,PH7.6洗液,室温漂洗3次每次10min。8) 配制DAB显色:根据用量,取TBS-T 4ml,加入DAB显色液A、DAB显色液B各200ul,混匀,加在膜正
面,室温下显色。在目标条带显出后,而且背景未出时,放入水中终止显色。
注意事项: 1. 请根据一抗来源选择试剂盒。2. western blotting DAB显色法操作简单,但其敏感性与ECL发光发有一定的差距,一般只适用于丰度较高的蛋白。3. 可以根据显色结果来优化实验反应时间。如背景过深,可延长膜封闭时间,加长最终漂洗次数与时间。如果条带过弱,可延长抗体孵育时间。4. 如果完全没有条带,请检查前期蛋白处理及实验过程, 如果确认无误,反复两次依旧无结果,请换用ECL发光法显色。5. TBS-T(0.01M)配制方法:称取NaCl 8.5g ,Tris 1.21g ,用800ml的双蒸水溶解,用盐酸调PH到7.6,再加入0.5ml Tween-20,用双蒸水加至1000ml,混匀即可。(也可按照自己的配制习惯来配制)
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