病毒核酸提取试剂盒(磁珠法)

中文名称：病毒核酸提取试剂盒(磁珠法)
英文名称：Magnetic Viral DNA/RNA Extraction Kit
产品规格：50T|200T
本试剂盒采用具有独特分离作用的磁珠和独特的缓冲液系统，从血清、血浆、淋巴液、无细胞体液、细胞培养上清液、尿液或各种病毒保存液中分离纯化高质量病毒DNA/RNA。独特包埋的磁珠，在一定条件下对核酸具有很强的亲和力，而当条件改变时，磁珠释放吸附的核酸，能够达到快速分离纯化核酸的目的。整个过程安全、便捷，提取的病毒DNA/RNA得率高、纯度高、质量稳定可靠，尤其适合高通量工作站的自动化提取。使用本试剂盒纯化的核酸可适用于各种常规操作，包括RT-PCR、荧光定量PCR等各种下游实验。

试剂盒特点：
简便快捷：1小时内即可获得高质量病毒DNA或RNA。
高通量：可整合磁棒法自动化仪器或移液法自动化仪器进行高通量提取实验。
安全无毒：无需酚/氯仿等有机试剂。

试剂盒组成：

保存条件：室温（15-25℃）干燥条件下，可保存12个月。

注意事项(请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项)
1．本产品适用于手工提取或自动化仪器整合。
2．自备试剂：异丙醇，无水乙醇。
3．样品应避免反复冻融，否则会导致提取的核酸片段较小且提取量降低。
4．若缓冲液RLCK中有沉淀，可在37℃水浴中重新溶解，摇匀后使用。

使用方法：

Carrier RNA溶液的配制如下：
● Carrier RNA溶液:向装有310μg Carrier RNA冻干粉的管子中加入310μL RNase-Free ddH2O，将Carrier RNA彻底溶解，得到终浓度为1μg/μL的溶液，并按实验情况分装到RNase-Free的离心管中，置于-20℃储存。使用时按照提取的次数取出相应的溶液，该溶液应避免反复冻融，冻融次数不能超过3次。
注意：Carrier RNA冻干粉不能直接溶解于裂解液RLCK中，必须先溶解在RNase-Free ddH2O中，再溶解至裂解液RLCK中。
● Carrier RNA工作液：根据样品的数量计算所需裂解液RLCK和Carrier RNA溶液的体积（见表1，按每310μL RLCK加入2.8μL Carrier RNA的比例进行配制），将裂解液RLCK与Carrier RNA溶液颠倒混匀，即得到Carrier RNA工作液；为避免溶液出现起泡现象，请勿使用涡旋振荡。

表1：Carrier RNA工作液的配制

一、手工提取步骤：
使用前请先在裂解液RLCK中加入异丙醇，加入体积请按照瓶上的标签。
使用前请先在漂洗液PWC和PWE中加入无水乙醇，加入体积请按照瓶上的标签。

1．取200μL血浆/血清/淋巴液（样品需平衡至室温）至1.5ml离心管（自备）中。
2．向离心管中加入15μL磁珠悬液G。
注意：为了确保磁珠彻底重悬，请在使用前振荡混匀。
3．向离心管中加入20μL蛋白酶K。
4．向样本中加入300μL Carrier RNA工作液(配制方法见表1)。盖上管盖，振荡混匀10 sec。
注意：当样本数目比较大时，可以按每300μL Carrier RNA工作液加入20μL蛋白酶K的比例预先混合，混合后每个样本用量为320μL，混合后的溶液室温放置不要超过1h，最好现用现配。
5．室温孵育10min，期间每3min上下颠倒混匀10 sec，使磁珠和核酸充分结合。简短离心以收集附着在管壁及管盖的液体。
6．将离心管放置于磁力架上静置1min，待磁珠完全吸附时小心去除液体。
7．将离心管从磁力架上取下，加入500μL漂洗液PWC（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），振荡混匀1min。
8．将离心管放置于磁力架上静置1min，磁珠完全吸附后，小心吸去液体。
9．将离心管从磁力架上取下，加入500μL漂洗液PWE（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），振荡混匀1min。
10．将离心管放置于磁力架上静置1min，磁珠完全吸附后，小心吸去液体。
11．重复步骤9和10一次。
12．离心管于磁力架上，56℃晾干5-10min。
注意：乙醇残留会抑制后续的酶反应，所以晾干时要确保乙醇挥发干净。但也不要干燥太长时间，以免难以洗脱核酸。
13．将离心管从磁力架上取下，加入100μL RNase-Free ddH₂O，56℃振荡混匀5min。
14．将离心管放置于磁力架上静置2min，待磁珠完全吸附后，小心将核酸溶液转移至一个新离心管(自备)中，并于适当条件保存。

二、磁棒法自动化仪器提取步骤（KingFisher Flex）
使用前请先在裂解液RLCK中加入异丙醇，加入体积请按照瓶上的标签。
使用前请先在漂洗液PWC和PWE中加入无水乙醇，加入体积请按照瓶上的标签。

1．在96深孔板(自备)中加入200μL血浆/血清/淋巴液（样品需平衡至室温）。
2．每孔加入15μL磁珠悬液G（使用前用移液器吹吸或涡旋振荡混匀磁珠）。
3．每孔加入20μL蛋白酶K。
4．每孔加入300μL Carrier RNA工作液（为缓冲液RLCK（使用前请先检查是否已加入异丙醇）与Carrier RNA溶液的混合液，配制方法按表1的比例进行配制）。盖上管盖，涡旋振荡10 sec。
注意：当样本数目比较大时，可以按每300μL Carrier RNA工作液加入20μL蛋白酶K的比例预先混合，混合后每个样本用量为320μL，混合后的溶液室温放置不要超过1h，最好现用现配。
5．按下表将样品和试剂转移DW Plate中，并用标鉴笔标下板的名称。

6．启动KingFisher BindIt 3.2程序，导入Pure Viral DNA_RNA Kit.bdz程序。
7．约33min后程序执行完毕。
8．取出DNA或RNA样品，用封口膜封好并保存于-80℃。 

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！