高尔基体蛋白提取试剂盒

中文名称：高尔基体蛋白提取试剂盒
英文名称：Golgi protein extraction kit
产品规格：50T|100T
高尔基体(Golgi apparatus,Golgi bodies)是由许多扁平的囊泡构成的以分泌为主要功能的细胞器。又称高尔基器或高尔基复合体；高尔基体是由数个扁平囊泡堆在一起形成的高度有极性的细胞器。常分布于内质网与细胞膜之间，呈弓形或半球形，凸出的一面对着内质网称为形成面(forming face)或顺面(cis face)。凹进的一面对着质膜称为成熟面(mature face)或反面(trans face)。顺面和反面都有一些或大或小的运输小泡，在具有极性的细胞中，高尔基体常大量分布于分泌端的细胞质中。因其看上极像滑面内质网，因此有科学家认为它是由滑面内质网进化而来的。
高尔基体中的酶主要有糖基转移酶、磺基-糖基转移酶、氧化还原酶、磷酸酶、蛋白激酶、甘露糖苷酶、转移酶和磷脂酶等不同的类型。高尔基体的主要功能将内质网合成的蛋白质进行加工、对比分类、与包装，然后分门别类地送到细胞特定的部位或分泌到细胞外。
高尔基体蛋白提取试剂盒提供全套试剂，适用于从各种动物细胞和实体软、硬组织样本的高尔基体提取。本试剂盒含有的蛋白酶抑制剂混合物，阻止了蛋白酶对蛋白的降解，为提取高纯度的蛋白提供了保证。
本试剂盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫沉淀、ELISA、转录活性分析、Gel shift凝胶阻滞实验、酶活性测定等下游蛋白研究实验。
本试剂盒提取的蛋白为具有天然蛋白构象的活性蛋白。
本试剂盒中不含有EDTA，与金属螯和层析等下游应用兼容。
本试剂盒提取的蛋白样本含有高浓度的盐成分，不可直接用于2D电泳，如下游实验需要直接用于等电聚焦、双向电泳，请使用我公司其他货号的试剂盒。也可以将最后样品除盐后再用于2D电泳，用脱盐柱脱盐处理。
我公司可以提供针对动物细胞、组织、植物、真菌、酵母、微生物、液体、土壤等不同样本的蛋白提取试剂盒，包含用于非双向电泳和双向电泳等不同下游应用的试剂盒以及含去垢剂成分和不含去垢剂成分的蛋白提取试剂盒，总计300 多种蛋白提取试剂盒可供选择。我公司还可以提供针对动物、植物等不同样本的细胞核、线粒体、溶酶体、叶绿体等不同细胞器的提取试剂盒。

储存条件：蛋白提取液2-8℃保存；蛋白酶抑制剂-20℃保存。
【注】：蛋白酶抑制剂未开盖使用前也可以2-8℃储存。开盖使用后-20℃储存。
有效期：一年。

※ ※ ※ 使用前请仔细阅读产品说明书 ※ ※ ※
使用限制：本试剂盒仅供科学研究使用，不可用于诊断或治疗。
产品更新：我公司会更新或升级产品，以优化和增强其使用性能，产品说明书会进行相应的版本更新。使用产品时，请参照试剂盒中随产品附带的印刷版说明书，不能参照网上下载的说明书，可能是不同的版本。需要最新电子版说明书时可以在收到产品后发邮件索取。
使用安全：使用时需要合适的实验室外套，一次性手套。避免皮肤或粘膜与试剂接触。如果试剂不小心接触皮肤或眼睛，应立即用水冲洗。

注意事项：
1．正式实验前请选取几个样本做预实验，以优化实验条件，取得最佳实验效果。
2．螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖和管内壁上的液体离心至管底，避免开盖时试剂损失。
3．禁止与其他品牌的试剂混用，否则会影响使用效果。
4．样品或试剂被细菌或真菌污染或试剂交叉污染可能会导致错误的结果。
5．最好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿，可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清洗并彻底清除残留清洁剂。
6．实验后完成后所有样品及接触过的器皿应按照规定程序处理。
试剂盒以外自备仪器和试剂耗材：
仪器
●离心机● 振荡器● 移液器●冰箱●冰盒
耗材
●离心管● 吸头
试剂
● PBS
(pH7.4，实验室常用的10mM磷酸缓冲盐溶液phosphate buffer saline/Dμlbecco’s PBS：约
含8mM Na2HPO4、2mM KH2PO4、137mM NaCl和3mM KCl)

使用方法：

使用注意事项：
● 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
● 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
● 最好使用Dounce 匀浆器匀浆，如果没有Dounce匀浆器，用普通1ml 玻璃匀浆器匀浆也可。
细胞高尔基体提取：
1．提取液准备：
每500μl冷的蛋白提取液D中加入2μl蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。
【注】：
● 根据需要处理的样品数量准备蛋白提取液，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。
● 加过蛋白酶抑制剂的提取液一周内未使用完，再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制剂。
2．取1-2×107个细胞，在4℃，500×g条件下离心2-3分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞。
3．用冷PBS 洗涤两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
4．加入400μl冷的试剂A，置冰上10分钟。
5．用Dounce 匀浆器充分匀浆几分钟，然后在4℃，1000g 力条件下离心5分钟。
6．弃沉淀，将上清吸入另一预冷的干净离心管。
7.在4℃，3000g 力条件下离心10分钟。
8．弃沉淀，将上清吸入另一预冷的干净离心管。
9.在上清中加入10μl试剂WT，在4℃，20000g 力条件下离心20分钟。
10．弃上清，在沉淀中加入500μl冷的试剂B，混匀。
11.在4℃，20000g 力条件下离心30分钟。弃上清，收集沉淀。
12.在沉淀中加入100-300μl蛋白提取液D，吹打混匀后，在4℃条件下振荡15-20分钟，至沉淀充分裂解，无明显沉淀。
【注】：
● 使用振荡器/摇床的较低转速，提取液能轻微晃动即可。
● 没有振荡条件也可以不振荡，稍微延长提取液的处理时间，中间每隔几分钟用移液器吹打混匀即可。
13.在4℃，12000g条件下离心15分钟。
14．将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到高尔基体蛋白样品。
15．将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
【注】：
● 建议用BCA 法进行蛋白定量。相关产品：HR0329。
●蛋白样品－80℃存放一年没有问题。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被细菌污染。
组织高尔基体提取：
1．提取液准备：
每500μl冷的蛋白提取液D中加入2μl蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。
【注】：
● 根据需要处理的样品数量准备蛋白提取液，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。
● 加过蛋白酶抑制剂的提取液一周内未使用完，再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制剂。
2．取50-100mg 新鲜动物组织样本，用PBS 洗涤干净。
3．用剪刀尽可能剪碎，用冷PBS 洗涤两次。
4．加入400μl冷的试剂A，置冰上10分钟。
5．用Dounce 匀浆器充分匀浆几分钟，然后在4℃，1000g 力条件下离心5分钟。
6．弃沉淀，将上清吸入另一预冷的干净离心管。
7.在4℃，3000g 力条件下离心10分钟。
8．弃沉淀，将上清吸入另一预冷的干净离心管。
9.在上清中加入10μl试剂WT，在4℃，20000g 力条件下离心20分钟。
10．弃上清，在沉淀中加入500μl冷的试剂B，混匀。
11.在4℃，20000g 力条件下离心30分钟。弃上清，收集沉淀。
12．弃上清，沉淀用高尔基体保存液重悬。
13.在沉淀中加入100-300μl蛋白提取液D，吹打混匀后，在4℃条件下振荡15-20分钟，至沉淀充分裂解，无明显沉淀。
【注】：
● 使用振荡器/摇床的较低转速，提取液能轻微晃动即可。
● 没有振荡条件也可以不振荡，稍微延长提取液的处理时间，中间每隔几分钟用移液器吹打混匀即可。
14.在4℃，12000g条件下离心15分钟。
15．将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到高尔基体蛋白样品。
16．将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
【注】：
● 建议用BCA 法进行蛋白定量。
●蛋白样品－80℃存放一年没有问题。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被细菌污染。
常见问题分析：
●用什么方法定量蛋白？
建议用BCA 法。不适合用Bradford 法，因为试剂A中含有干扰Bradford 法的组份，导致定量不准。如果已经进行过透析处理或者用脱盐柱改换过缓冲体系，则可以用Bradford 法定量。
● 提取的蛋白具有活性吗？
本试剂盒不含有离子型去垢剂组份，不破坏蛋白的结构，没有对蛋白质之间原有的相互作用的破坏，蛋白均保持其天然构象和活性。 

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！