Mouse IL-5 ELISA KIT
品牌：Solarbio | 货号：SEKM-0006
中文名称
小鼠白介素5检测试剂盒
英文名称
Mouse IL-5 ELISA KIT
反应性
Mouse
样品类型
Serum, plasma, Cell culture supernatant
灵敏度
7 pg/ml
检测目标
IL-5
应用
Sandwich ELISA
背景介绍：
 IL-5 主要由活化 T 细胞产生，在小鼠则由 Th2 亚群细胞产生。小鼠 IL-5 由 133 氨基酸残
基组成，含21氨基酸的信号肽，成熟IL-5分子含有112氨基酸残基，裸肽分子量12～15kDa，
有 3 个糖基化位点，糖基化后分子量为 18kDa，糖基化对于 IL-5 活性表达以及与相应受体
的结合起重要作用。小鼠 IL-5 通常以二硫键连接的二聚体形式存在，分子量为 45kDa。人
和小鼠 IL-5 基因分别定位于第 5 号和第 11 号染色体，与 IL-3、IL-4、GM-CSF 等造血因子
的基因密切连锁。人和鼠 IL-5 在氨基酸水平上有 70%的同源性，，生物学作用有交叉反应。
由于 mRNA 剪接的不同，已发现有二种可溶性小鼠 IL-5Rα 链，其中一种可抑制 IL-5 与膜
结合 IL-5R 的结合。人和鼠 IL-5Rα 链有 79%的同源性 
检测原理：
 Solarbio (Solarbio ®)ELISA 试剂盒采用基于双抗体夹心法的酶联免疫吸附检测技术。将抗小
鼠 IL-5 单克隆抗体包被在酶标板上；分别加入梯度稀释的标准品和预稀释的样本，标准品
和样本中的小鼠 IL-5 会与酶标板上的包被抗体充分结合；洗板后加入生物素化抗小鼠 IL-5
抗体，该抗体会与板子上包被抗体捕获的标准品和样本中的小鼠 IL-5 发生特异性结合；洗
板后加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的链霉亲和素，生物素与链霉亲和素会发生高强度的
非共价结合；洗板后加入显色剂底物 TMB，若反应孔中样品存在不同浓度的小鼠 IL-5，则
HRP 会使无色 TMB 变成不同深浅（正相关）的蓝色物质，加入终止液后反应孔会变成黄色；
最后，在 λmax=450nm（OD=450 nm）处测定反应孔样品吸光度（OD），样本中的小鼠 IL-5
浓度与 OD 成正比，通过绘制标准曲线和四参数拟合软件便可计算出样本中小鼠 IL-5 的浓
度。 
原理图：
 
注意事项：※※※ 
1. 试剂盒应在有效期内使用，请不要使用过期的试剂。 
2. 试剂盒未使用时应保存在 2-8℃冰箱，已复溶但未用完的标准品，请丢弃。 
3. 试剂盒使用前请在室温恢复 30min，且充分混匀试剂盒里的各种成份及制备的样品。 
4. 在试验中标准品和样本建议作复孔检测，且加入试剂的顺序应保持一致。 
5. 为避免交叉污染，请在试验中使用 1 次性试管，枪头，封板膜（※）及洁净塑料容器。. 
6. 浓缩生物素化抗体和浓缩酶结合物的体积较少，在运输过程中微量液体会沾到管壁及瓶
盖上，使用前请离心处理（5-10 S 即可），使管壁上的液体集中在管底部，取用时，请
用移液器小心吹打几次。 
7. 除了试剂盒中的浓缩洗涤液和终止液可以通用外，请不要使用其他来源试剂盒内含的试
剂代替本试剂盒中的某单个组分。 
8. 为保证结果准确，每次检测均需做标准曲线。 
安全提示：
试剂盒中的终止液为酸性溶液，操作人员在使用时请带上手套并注意防护；在操
作过程中也要避免试剂接触皮肤和眼睛，如果不慎接触，请用大量清水清洗；检测血液样本
及其它体液样本时，请按国家生物实验室安全防护有关管理规定执行。 
试剂盒组成及储存： 


自备实验器材（不提供，可代购） 
1． 酶标仪（主波长 450nm，参考波长 630nm） 
2． 高精度移液器及一次性吸头：0.5-10,2-20,20-200,200-1000μl 
3． 洗板机或洗瓶 
4． 37℃孵育箱 
5． 双蒸水，去离子水，量筒等 
6． 稀释用聚丙烯试管 
样本收集及储存： 
1. 细胞培养上清：
将细胞培养基移至无菌离心管，在 4℃条件下 1000×g 离心 10 min,然后将上清等量分装
于小 EP 管并于-20℃下保存（24 小时内检测可放入 2-8℃储存），避免反复冻融。 
2. 血清样本：
室温血液自然凝固 20 min 后，在 4℃条件下 1000×g 离心 10 min，然后将上清等量分装
于小 EP 管并于-20℃下保存（24 小时内检测可放入 2-8℃储存），保存过程中如有沉淀，
请再次离心，避免反复冻融。 
3. 血浆样本：
将全血收集到含抗血凝剂的管中，根据标本的实际要求选择 EDTA，柠檬酸钠或肝素作
为抗凝剂，混合 20 min，在 4℃条件下 1000×g 离心 10 min，然后将上清等量分装于小
EP 管并于-20℃下保存（24 小时内检测可放入 2-8℃储存），避免反复冻融。 
※注意：
血清血浆样本避免使用溶血、高血脂样本，以免影响检测结果；如果样本中的靶标
物检测浓度高于标准品的最高值，请将样品做适当倍数稀释后检测，建议正式实验前做预实
验以确定稀释倍数。 
试剂准备： 
1. 试剂回温：首先在实验前 30 min 将试剂盒，待测样本放置于室温下，浓缩洗涤液如出现
结晶，请放入 37℃温浴直到结晶全部溶解。 
2. 配制洗涤液：预先计算好稀释后的洗涤液使用体积，然后用双蒸水或去离子水将 20 倍
浓缩洗涤液稀释成 1 倍应用液，未用完的浓缩洗涤液放入 4℃冰箱保存。 
3. 标准品梯度稀释：加入标准品/样本稀释液（SR1）1ml至冻干标准品中，静置15分钟待
其完全溶解后轻轻混匀(浓度为2000pg/ml)，然后按照以下浓度：2000、1000、500、250、
125、62.5、31.25、 0 pg/ml进行稀释。复溶过的标准品原液（2000pg/ml）未用完的应
废弃或根据需要按照一次用量分装，并将其贮存在-20～-80℃冰箱，具体如下图。




4. 生物素化抗体工作液：预先计算好试验所需用量，用检测稀释液（SR2）将100倍抗体浓
缩液稀释成1倍应用工作液（稀释前充分混匀），请在30分钟内加入到反应孔中。 





5. 酶结合物工作液：按每次试验所需用量配制，用酶结合物稀释液（SR3）将100倍浓缩酶
结合物稀释成1倍应用工作液（稀释前离心），请在30分钟内使用。





6. 洗涤方法：
  自动洗板：甩尽酶标板孔中液体，在厚迭吸水纸上拍干，注入洗涤液为 300ul/
孔,注与吸出间隔为 30 秒，洗板 5 次。 
 手工洗板：甩尽酶标板孔中液体，在厚迭吸水纸上拍干，用洗瓶加入洗涤液
300ul/孔，静止 30 秒后甩净酶标板孔中液体，在厚迭的吸水纸上拍干，洗板 5 次。




结果判断： 
1.用酶标仪 450 nm 波长测定 OD 值。选择双波长检测，参考波长为 630 nm。如不能进行
双波长检测，请用 450 nm 的 OD 测定值减去 630 nm 的 OD 测定值。 
2.计算标准品、样品的平均 OD 值：每个标准品和标本的 OD 值应减去零孔的 OD 值
3.以标准品浓度为横坐标，吸光度OD值为纵坐标，用软件绘制标准曲线，样品中IL-5含量可
通过对应OD值由标准曲线换算出相应的浓度。 
4.若标本 OD 值高于标准曲线上限，应做适当稀释后重新检测，计算浓度时再乘以稀释倍数。 


参数表征：


2. 灵敏度： 
最低可检测小鼠 IL-5 浓度达 15pg/ml，
20 个零标准品浓度 OD 的平均值加上两个标准差，计算相应的可检测浓度。 
3. 特异性： 
不与小鼠 IFN-γ、 IL-1α、 IL-1β、 IL-1ra、 IL-2 、IL-3、 IL-4、 IL-6、 IL-7、 IL-9 、IL-10 、
IL-10 R、 IL-12、 IL-13、 IL-17 、IL-18 反应，人 IL-5、IL-5R 等反应 
4. 重复性： 
板内，板间变异系数<10% 
5. 回收率： 
在选取的健康小鼠血浆、细胞培养上清中加入 3 个不同浓度水平的小鼠 IL-5，计算回收率。



6. 线性稀释： 
分别在选取的 4 份健康小鼠血浆和细胞培养上清中加入高浓度小鼠 IL-5，在标准曲线动力
学范围内进行稀释，评估线性。