产品简介

Hieff NGS® mRNA Isolation Master Kit V2是专门用于纯化mRNA的升级版磁珠试剂盒。其中的mRNA Capture beads为偶联了Oligo（dT）的微米级顺磁性微球，通过与带有poly（A）尾巴的mRNA相结合，将mRNA从10 ng-4 μg完整度良好的总RNA中进行分离纯化。

产品信息

组分信息

储存条件

2-8℃保存，有效期一年。

使用方法

一、自备材料

磁力架，Nuclease-free离心管、PCR仪等。

二、操作流程

三、操作步骤

3.1 实验前准备

将mRNA Capture Beads 2.0从2-8℃取出，静置使其温度平衡至室温（约30 min）。

3.2 样本准备

在一个Nuclease-free PCR管中，用Nuclease-free water将10 ng-4 μg总RNA稀释至50 μL，冰上放置备用。

3.3 mRNA与磁珠的结合

① 颠倒或涡旋振荡混匀磁珠，吸取50 μL磁珠悬液加入至50 μL 总RNA样品中，用移液器反复吹打6次，

使其充分混匀。

② 将磁珠与RNA的混合物置于PCR仪中，65℃，5 min；25℃，5 min；25℃，hold，完成RNA与捕获磁珠的结合。

③ 将样品置于磁力架中，室温静置5 min，使mRNA与总RNA分离，小心移除上清。

3.4 样本的洗涤

① 将样品从磁力架上取出，加入200 μL Beads Wash Buffer2.0重悬磁珠，用移液器反复吹打6次以彻底混匀。

② 将样品置于磁力架中，室温静置5 min，小心移除上清。

③ 重复上一步骤，共洗涤两次。

3.5 mRNA样本第一轮洗脱

① 将样品从磁力架上取出，加入50 μL Tris Buffer2.0重悬磁珠，用移液器反复吹打6次以彻底混匀。

② 将样品放置于PCR仪中，80℃，2 min；25℃，hold，将mRNA洗脱下来。

3.6 mRNA与磁珠的再次结合

① 将样品从PCR仪中取出，加入50 μL Beads Binding Buffer2.0，用移液器反复吹打6次以彻底混匀。

② 室温孵育5 min，使mRNA结合到磁珠上。

③ 将样品置于磁力架中，室温静置5 min，小心移除上清。

3.7 样本的洗涤

将样品从磁力架上取出，加入200 μL Beads Wash Buffer2.0重悬磁珠，用移液器反复吹打6次彻底混匀，将样品重新放回至磁力架中，室温静置5 min，然后吸除全部上清。

【注】：最后需要用10 μL移液器吸干净残留液体。

根据后续实验流程选择处理方式：

a. 若纯化产物用于逆转录反应，将样品从磁力架上取出，加入10.5 μL Nuclease-free water，用移液器吹打6次充分混匀，80℃ 2 min，立即置于磁力架上5 min，待溶液澄清后，小心吸取8.5 μL上清至一个新的Nuclease-free PCR管中。

b. 若纯化产物用于RNA文库构建，如Hieff NGS® Ultima Dual-mode RNA Library Prep Kit 双模式RNA建库试剂盒(兼容Illumina和MGI)(Cat #12308或12310)，按照说明书加入相应体积的Frag/Prime Buffer，进行文库构建。

注意事项

1.磁珠使用前务必要回温至室温，并充分混匀，否则可能影响样品的回收效率。

2.操作过程要严格保证无RNase和核酸污染。

3.本产品和其他试剂配套使用时，请按照具体实验说明来进行操作。

4.想要获得好的纯化效果，需要有完整度良好的总RNA，确保RIN值在7.0及以上。

5.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

6.本产品仅用作科研用途！

Ver. CN20230703