谷丙转氨酶测定试剂盒 微量法
产品名称: 谷丙转氨酶测定试剂盒 微量法
英文名称: Micro Glutamic-pyruvic Transaminase(GPT)Assay Kit
产品编号: BC1555
产品价格: 0
产品产地: 北京市通州区马驹桥联东U谷85A三
品牌商标: Solarbio
更新时间: 2024-11-25T09:26:42
使用范围: null
- 联系人 : 索莱宝-龚思雨
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产品内容:
提取液:液体60mL×1瓶,4℃保存。
试剂一:液体3.5 mL×1瓶,4℃保存;
试剂二:液体3.5 mL×1瓶,4℃保存;
试剂三:液体30 mL×1瓶,4℃保存;
标准品:液体1mL×1支,20μmol/mL丙酮酸钠标准品,4℃保存。
产品说明:
GPT(EC 2.6.1.2)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,催化氨基酸和酮酸转氨基反应,在氨基酸代谢中具有重要作用。此外,哺乳动物肝细胞GPT活性很高,当肝细胞坏死,GPT释放到血液中,血清GPT活性显著增高。因此,GPT被世界卫生组织推荐为肝功能损害最敏感的检测指标。
GPT催化丙氨酸和α-酮戊二酸发生转氨基反应,生成丙酮酸和谷氨酸;加入2,4-二**苯肼溶液,不仅终止上述反应,而且与酮酸中的羰基加成,生成丙酮酸苯腙;苯腙在碱性条件下呈红棕色,可以在505nm读取吸光值并计算酶活力。
自备仪器和用品:
可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。
操作步骤:
一、样品测定的准备
1、细胞或微生物样品的制备:
先收集细胞或微生物样品到离心管内,弃上清,按照每500万细胞或微生物加入1mL提取液,超声波破碎细菌或细胞(功率20%,超声3s,间隔10s,重复30次)。3500g,4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
2、组织:
称取约0.1g组织,加入1mL提取液进冰浴行匀浆。3500g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
3、血清(浆)样品:直接检测。
二、测定操作表:
1、 分光光度计预热30min以上,调节波长至505nm,蒸馏水调零。
2、 标准曲线的测定
首先将标准品稀释至2μmol/mL,按下表混合标准品和试剂一得到浓度梯度标准管:
标准品(μL)
试剂一(μL)
标准管浓度(μmol/mL)
22.5
7.5
1.5
15
15
1
12
18
0.8
6
24
0.4
3
27
0.2
1.5
28.5
0.1
0.75
29.25
0.05
0
30
0
3、 在EP管中加入下列试剂
试剂名称(μL) | 测定管 | 对照管 | 标准管 | ||||||
待测样本 | 5 |
|
| ||||||
试剂一 | 25 | 25 |
| ||||||
标准液 |
|
| 30 | ||||||
混匀后,37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)预热30min | |||||||||
试剂二 | 25 | 25 | 25 | ||||||
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